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    現(xiàn)貨人干擾素-α抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒

    發(fā)布時(shí)間: 2012-08-10  點(diǎn)擊次數(shù): 1166次

    人干擾素-α抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒            

    本試劑僅供研究使用  標(biāo)本:血清或血漿

    試驗(yàn)原理:
        IFNα-Ab試劑盒是間接法法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知IFNα-Ab濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將IFNα-Ab和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IFNα-Ab的濃度呈比例關(guān)系。

    自備材料
    蒸餾水。
    加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
    振蕩器及磁力攪拌器等。

    安全性
    避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
    實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
    不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

    人干擾素-α抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒

    操作注意事項(xiàng)
    試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
    實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
    不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
    使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
    使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
    洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
    底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
    加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
    按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

    樣品收集、處理及保存方法
    血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
    血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
    細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
    保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

    試劑的準(zhǔn)備
    標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:
    40 IU/L (6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
    20 IU/L (5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    10 IU/L (4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    5.0 IU/L (3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    2.5 IU/L (2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    1.25 IU/L (1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品) 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
    0 IU/L (空白對(duì)照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

    洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。

    人干擾素-α抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒

    操作步驟
    使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
    根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
    加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
    甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
    每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
    甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
    每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
    取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
    在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

    6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到的結(jié)果。

    試劑盒性能
    1. 靈敏度:zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
    2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
    3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

    人干擾素-α抗體ELISA 檢測(cè)試劑盒

    結(jié) 果 判 斷 與 分 析
    1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

    2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的IFNα-Ab標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的IFNα-Ab含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

    3、檢測(cè)值范圍:0-40IU/L

    4、敏感度: 0.1 IU/L

    Vancomycin hydrochloride 萬(wàn)古霉素鹽酸鹽 [1404-93-9] 1g
    Vancomycin hydrochloride 萬(wàn)古霉素鹽酸鹽 [1404-93-9] 100mg
    Vancomycin hydrochloride 萬(wàn)古霉素鹽酸鹽 [1404-93-9] 250mg
    Vancomycin hydrochloride 萬(wàn)古霉素鹽酸鹽 [1404-93-9] 1g
    Vanillin 香蘭素 [121-33-5] 100g
    o-Vanillin 鄰香蘭素 [148-53-8] 50g
    Verruculogen from Penicillium verruculosum, 震顫真菌毒素 [12771-72-1] 1mg
    1-Vinyl-2-pyrrolidinone N-乙烯基吡咯烷酮 [88-12-0] 250g
    Vitamin E 維生素E [10191-41-0] 25g
    Vitamin K1 維生素K1 [84-80-0] 5g
    2-Vinylnaphthalene 2-乙烯基萘 [827-54-3] 10g
    Vitamin A acetate 維生素A醋酸酯 [127-47-9] 25g
    Vitamin A acetate 維生素A醋酸酯 [127-47-9] 25g
    Vitamin B1 維生素B1 [67-03-8] 50g
    Vitamin B12 維生素12 [68-19-9] 1g
    Vitamin D2 維生素D2 [50-14-6] 5g
    Vitamin D3 維生素D3 [67-97-0] 1g
    Vitamin D3 維生素D3 [67-97-0] 5g
    Vitamin E acetate 維生素E乙酯 [7695-91-2] 5g
    Vitamin K3 維生素K3 [58-27-5] 100g
    Vitexin 牡荊素 [3681-93-4] 20mg
    Withaferin A from leaves of Withania somnifera 醉茄素A, [5119-48-2] 5mg
    Wood’s metal 伍德合金 [76093-98-6] 100g
    Wool fat 羊毛脂 [8006-54-0] 500g
    Wortmannin from Talaromyces (Penicillium) wortmannii 渥曼素. KY 12420 [19545-26-7] 5mg
    Xanthine 黃嘌呤 [69-89-6] 5g
    Xanthine Oxidase From Butter milk 黃嘌呤氧化酶. [9002-17-9] 60U
    Xanthine Oxidase From Butter milk 黃嘌呤氧化酶. [9002-17-9] 300U
    X-Gal 5-溴-4-氯-3吲哚基-D半乳糖苷 [7240-90-6] 100mg
    X-Gal 5-溴-4-氯-3吲哚基-D半乳糖苷 [7240-90-6] 1g
    X-Gal 5-溴-4-氯-3吲哚基-D半乳糖苷 [7240-90-6] 5g
    X-Gal 5-溴-4-氯-3吲哚基-D半乳糖苷 [7240-90-6] 100mg
    X-Gal 5-溴-4-氯-3吲哚基-D半乳糖苷 [7240-90-6] 1g
    X-GLUC 5-溴-4-氯-3-吲哚基-beta-D-葡糖苷酸環(huán)己胺鹽 [114162-64-0] 25mg

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